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基因编辑动物净化之——体外受精
体外受精是基因编辑动物净化中常用的一项技术操作，但对于体外受精的各类方法你真的了解吗?今天小编就带大家走入体外受精的世界!快来看看与你所知的体外受精有什么不一样吧!!
从狭义上讲，体外受精是指将动物受精过程中的精卵结合在体外环境下完成的一种现象，包括自然条件下的体外受精和人为培养条件下的体外受精。而目前所指的体外受精技术，即为将哺乳动物的精子和卵子置于体外适宜的培养条件下使之完成受精的一种技术。在生物学中，把体外受精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物(test-tube animal)。
从广义上讲，体外受精又包含卵母细胞的体外成熟培养和受精卵的体外培养两项密切相关的技术。
1.体外受精技术的基本原理
人工模拟体内环境(包括营养、温度、pH值等)，使初级卵母细胞成熟，同时使精子获能，最终完成受精作用，并有计划地保存胚胎。
2.体外受精的主要技术环节
✮卵母细胞的获得和体外成熟、✮精子的体外获能、✮成熟卵母细胞与获能精子的体外受精、✮受精卵的体外培养、✮受精卵的移植。
3.卵母细胞的采集与体成熟特征
卵母细胞采集
①卵泡抽吸法：用注射器针头穿刺卵泡而将卵母细胞抽吸出来。注射器保持一定负压，针头从卵泡侧面刺入，一次进针抽吸卵巢皮质多个卵泡，避免污染。
优点：回收速度快，不易造成污染;
缺点：容易损伤卵母细胞周围的卵丘细胞。
②卵泡剥离法：用无菌眼科剪刀或刀片，自卵泡周围，将周围组织分离，取下完整的圆形卵泡，放到加油培养液的平皿中，切开卵泡，卵泡液带着卵母细胞流出。
优点：对卵丘-卵母细胞复合体的损伤小;
缺点：程序较为复杂。
③切剖法：用平行排列成组的剃须刀片纵横切割卵巢，回收液体放在捡胚皿中，37℃培养箱静止10min，用注射器吸取上清，镜检卵母细胞。
优点：回收效率较高;
缺点：费时。
④卵巢解剖法：用手术刀片将卵巢切为两半，去掉中间髓质部分，露出卵泡，然后用刀片划破卵泡，在培养液中反复冲洗，采集其中的卵母细胞。
优点：能保持卵母细胞周围卵泡细胞的完整性，回收率相对比较高;
缺点：回收速度相对较慢，容易造成污染。
体成熟特征：
✮生发泡破裂;✮染色体凝集;✮纺缍体形成;✮极体排出;✮透明带软化;✮卵丘细胞扩展。
4.精子制备的方法
卵母细胞采集
①悬浮法：根据精子运动上游的特性而将高活力的精子与死精子以及其他精浆成分分开。将精液置于含有1~1.5ml获能液或受精液的试管底部，在培养箱中孵育10~30min，吸取上层液体，然后离心洗涤1~2次，即可获得高活力的洁净精子。
优点：适用于精子活力较差的精液;
缺点：精子的可利用率则大大降低。
②玻璃棉过滤：采用玻璃柱层过滤分离，可有效的除去品质较差精液中的死精子。
优点：制备时间较短;
缺点：器材来源和成本较高，未广泛应用。
③哌可密度梯度离心：根据形态正常的精子密度高于异常，经平衡离心后，形态正常的精子将聚集于高密度的哌可区域，从而分离得到高收精力的正常精子。常用哌可密度梯度为30%和45%，平衡离心10min(300g)。
优点：可分离高质量的精子，且精子的利用率较高;
缺点：精子体外受精结果受哌可质量的影响。
④离心洗涤法：取0.1~0.2ml的精液置于离心管中，然后加入5~10ml的获能液或受精液，离心5min(300g)，去掉上清液后，再加入5~10ml的获能液或受精液离心洗涤一次，即可用于受精。
优点：简单，精子利用率高;
缺点：对精子没有分选作用，不宜用于精子活力差和受精力较低的精液。
以上就是小编整理的体外受精各类方法及其优缺点，你决定pick哪个呢!让我们在留言区见吧!
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